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VACANTE
VACANTE Jefe de Unidad

Histología

Indicación

Técnica empleada para el estudio microscópico de los tejidos.

Descripción de la técnica

Se realizan cortes de tejido y se tiñen con distintas tinciones histológicas entre las que se encuentran Tinción Azul Alcián, Rojo Congo, Giemsa, Tricromo de Masson, PAS, Reticulina, Tioflavina, Ziehl-Neelsen, y Hematoxilina y Eosina.

  • Técnicas Histológicas
  • Additional slides unstained
  • Antigen retrieval+Deparaffinization
  • H&E/NFR stain on precut slides
  • Hematoxylin & Eosin
  • Human bone marrow decalcification
  • Mouse decalcification
  • Nuclear fast red
  • Paraffin sections for PCR
  • Serial sections
  • Special Stains in Histology-H

Inmunohistoquímica

Indicación

Técnica empleada para ver la expresión de determinadas proteínas en un tejido.

Descripción de la técnica

Se realizan cortes de tejido y se determina la expresión de proteínas mediante el uso de anticuerpos específicos.

Para la detección de la señal están disponibles sistemas de visualización basados en polímeros que amplifican la señal.

La ventaja de poder utilizar diferentes enzimas Peroxidasa de Rábano (HRP) o Fosfatasa Alcalina (PA) con cromógenos específicos (DAB, Fast-Red, ..) nos permite realizar dobles tinciones para poder analizar colocalización de diferentes proteínas.

Todo el proceso se realiza de forma automatizada. La Unidad dispone de 3 plataformas: Dako-Autostainer Plus, Leica-Bond MAX y Roche-BenchMark Ultra, que permiten adaptar el mejor protocolo para cada anticuerpo.

Hibridación “in situ” Cromogénica (CISH) y/o con Plata (SISH)

Indicación

Las técnicas de Hibridación “in situ” consisten en la detección de secuencias específicas de ácidos nucleicos (ADN o ARN) dentro de las células, mediante el empleo de sondas específicas marcadas.

Descripción de la técnica

Las sondas EBER, Kappa y Lambda están marcadas con Fluoresceína y se usan con el sistema automatizado Vision Biosystems (Bond) con visualización cromogénica DAB.

El kit HER2 CISH consiste en una visualización cromogénica en dos colores de señales, conseguidas con sondas específicas para el gen HER2 (señal roja) y la región centromérica del cromosoma 17 (señal azul). Se utiliza una mezcla de sondas de ADN marcadas con rojo Texas para el gen HER2, y una mezcla de sondas ANP marcadas con fluoresceína para la región centromérica del cromosoma 17 (CEN-17).

En el método SISH, el gen HER2 se detecta mediante hibridación con una sonda DNA marcada con Dinitrophenol (DNP) y visualización con plata, seguida de una hibridación con sonda para el centrómero CEN-17, marcada con DNP y visualización con Fast Red.

Sondas disponibles

Técnicas de hibridación in situ Cromogénicas (CISH)

ALU Positive Control Probe II

La sonda EBER se utiliza para la identificación de la infección latente producida por el virus Epstein-Barr (EBV), asociada a varias enfermedades como el linfoma de Hodgkin, linfoma de células B, carcinoma nasofaríngeo, gástrico y otras.

Las sondas Kappa y Lambda son para la identificación del ARN mensajero de las cadenas ligeras Kappa y Lambda de las inmunoglobulinas de las células B.

El gen HER2 se amplifica y sobre-expresa en las formas invasivas de cáncer de mama, útero, ovario, endometrio, gástrico, próstata, y en osteosarcomas. Representa un factor de predicción de la eficacia terapéutica con el anticuerpo monoclonal Trastuzumab (Herceptin).

Tissue MicroArrays

Indicación

Esta técnica permite el análisis simultáneo de múltiples muestras de tejidos integradas en un único bloque de parafina, permitiendo la monitorización de expresión de cientos de tejidos o muestras tumorales en un único experimento. Esto garantiza la homogeneidad de resultados entre las muestras y un considerable ahorro de tiempo y reactivos.

Entre las aplicaciones de esta técnica están:

  • Puesta a punto de nuevos marcadores moleculares con valor pronóstico.
  • Control de calidad de las técnicas de Inmunohistoquímica e hibridación “in situ”.
  • Optimización de sondas y anticuerpos.
  • Validación de los datos obtenidos en los cDNA microarrays.
  • Análisis simultáneo y masivo del perfil molecular de gran nº de tumores.

Descripción de la técnica

Se construye un bloque “recipiente” de parafina, y se van incluyendo en él los cilindros de las muestras que queremos analizar. Seleccionamos el diámetro (0.6mm, 1mm, 1.5mm, 2mm) y dependiendo de éste, se pueden incluir hasta 400 muestras o cilindros en un mismo bloque. Este bloque de TMA se puede cortar de forma habitual para hacer técnicas histológicas, inmunohistoquímicas y de hibridación “in situ”.

  • Es importante seleccionar bloques donantes de más de 2mm de profundidad tisular.
  • Si el bloque está muy desgastado y casi no tiene parafina, conviene rehacerlo.
  • Hacer una HE reciente de los bloques y marcar con rotulador el área seleccionada.
  • Adjuntar un listado Excel con las muestras a incluir.

Microdisección por Láser

Indicación

La microdisección mediante captura por láser consiste en aislar pequeñas áreas de células o células independientes de una sección histológica para el posterior estudio de DNA, RNA y proteínas.

Descripción de la técnica

El equipo empleado, PALM microbeam de Zeiss, está basado en el microscopio invertido Axio Observer de Carl Zeiss, controlado a través del software Palm-microbeam. La característica principal de este equipo es la posesion de un láser de N2 (“láser frio” λ=337nm), que trabaja a longitudes de onda diferentes a las radiaciones UVA, evitándose así dañar el ADN de las células microdiseccionadas. El láser sale a través de los objetivos del microscopio y solamente realiza el corte de la zona seleccionada para el estudio, el resto de la muestra no se ve afectada, evitando así, posibles alteraciones en las estructuras subcelulares. Después de la microdisección, las muestras aisladas se catapultan directamente en la tapa de un eppendorf.

Inmunohistoquímica

Referencias

  • Cano I, Lozano M, Rodríguez A, Mate A, Adrados M, López Mdel M, Carro R, Montes-Moreno S. Nodular lymphocyte-predominant Hodgkin lymphoma and T cell histiocyte-rich large B cell lymphoma: diagnosis in two monozygotic twins. Histopathology. 2010 Jul;57(1):159-62
  • Guerra C, Collado M, Navas C, Schuhmacher AJ, Hernández-Porras I, Cañamero M, Rodriguez-Justo M, Serrano M, Barbacid M. Pancreatitis-induced inflammation contributes to pancreatic cancer by inhibiting oncogene-induced senescence. Cancer Cell. 2011 Jun 14;19(6):728-39. doi: 10.1016/j.ccr.2011.05.011.
  • Delgado-Calle J, Sañudo C, Sánchez-Verde L, García-Renedo RJ, Arozamena J, Riancho JA. Epigenetic regulation of alkaline phosphatase in human cells of the osteoblastic lineage. Bone. 2011 Oct;49(4):830-8. Epub 2011 Jun 13.
  • Adjuntar un listado Excel con las muestras a incluir.

Análisis de Imágen

Equipo de Applied Imaging Ariol

El sistema de análisis de imagen ARIOL es un sistema de análisis de imagen automatizado desarrollado para cuantificar marcadores muy variados tanto en campo claro como en fluorescencia. Una vez escaneado el portaobjetos de interés, mediante el software ariol se realiza el realiza cuantificaciones de marcadores nucleares, de membrana, citoplasmáticos, contaje de células, densidad vasos tanto en cortes histológicos de tejido como en Tissue microarray de tejidos.

Respondiendo así a las necesidades del diagnóstico y la investigación, ya que la flexibilidad del sistema permite al usuario adaptar este sistema a multitud de análisis cuantitativos como cualitativos.

Inmunohistoquímica

Referencias

  • Aggarwal M, Villuendas R, Gomez G, Rodriguez-Pinilla SM, Sanchez-Beato M, Alvarez D, Martinez N, Rodriguez A, Castillo ME,Camacho FI, Montes-Moreno S, Garcia-Marco JA, Kimby E, Pisano DG, Piris MA. TCL1A expression delineates biological and clinical variability in B-cell lymphoma. Mod Pathol. 2009 Feb;22(2):206-15. Epub 2008 Sep 26.
  • Wahlin BE, Aggarwal M, Montes-Moreno S, Gonzalez LF, Roncador G, Sanchez-Verde L, Christensson B, Sander B, Kimby E. A unifying microenvironment model in follicular lymphoma: outcome is predicted by programmed death-1–positive, regulatory, cytotoxic, and helper T cells and macrophages. Clin Cancer Res. 2010 Jan 15;16(2):637-50. Epub 2010 Jan 12.
  • Matheu A, Collado M, Wise C, Manterola L, Cekaite L, Tye AJ, Canamero M, Bujanda L, Schedl A, Cheah KS, Skotheim RI, Lothe RA,López de Munain A, Briscoe J, Serrano M, Lovell-Badge R. Oncogenicity of the developmental transcription factor Sox9. Cancer Res. 2012 Mar 1;72(5):1301-15. Epub 2012 Jan 13.

Dotslide

El equipo Dotslide está formado por el microscopio óptico Olympus BX51, de campo claro, cuyos componentes están completamente motorizados y controlados mediante un software de captura de imagen que monitoriza y automatiza el proceso de escaneado, permitiendo la creación preparaciones digitales. Utilizando el software Olyvia Viewer pueden verse con la misma precisión que un microscopio en cualquier ordenador. Además, pueden realizarse estudios morfométricos, y estimaciones de áreas.

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