Lola Martinez Jefe de Unidad
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¿Qué es la Citometría de Flujo?

La Citometría de Flujo es una forma especializada de microscopia de fluorescencia en la cual células o partículas, en suspensión, pasan a traves de un punto de interrogación (laser beam) en el que se toman y cuantifican diversas mediciones relacionadas con las propiedades físicas y químicas de cada célula. Nos permite tomar varias medidas en grandes grupos de celulas en un tiempo corto, convirtiéndola en una herramienta muy poderosa y útil para el análisis de poblaciones raras definidas especificamente, de ahí su importancia en el campo de la investigación del cancer.

Equipamiento de la Unidad:

Actualmente nuestra unidad cuenta con 4 citometros analizadores y 2 separadores celulares:

1 FACS Calibur (Becton Dickinson): sistema analítico equipado con dos laseres y con capacidad de medir hasta 6 parámetros, cuenta con un láser de 488nm y uno de 635nm.
Usa CellQuest v5.1.1 como software de acquisición.

1 FACS Canto II (Becton Dickinson): sistema analítico equipado con 3 láseres de estado sólido y con capacidad de medir un máximo de 10 parámetros. Cuenta con una línea de 405nm, de 488nm y de 633nm. La configuración actual del instrumento permite medir 4 parametros de fluorescencia provinientes del 488nm y 2 parametros provinientes del laser rojo y del laser violeta respectivamente. Esta equipado con un sistema de High Throughput (modulo HTS) que permite analizar placas de 96- y 384 pocillos.
Usa FACS DIVA v como software de acquisición.

1 FACS Array (Becton Dickinson): sistema analítico equipado con 2 laseres (488nm y 633nm), con capacidad para analizar 6 parámetros. Su configuración actual permite la detección de dos parametros de fluorescencia provinientes del láser azul y otros dos provinientes del láser rojo. Usa placas de 96 lo que lo hace interesante para análisis de high throughtput.
Usa FACS Array Software 1.0.3 como software de acquisición.

1 LSRII FORTESSA (Becton Dickinson): sistema analítico equipado con 4 laseres (488nm, 561nm, 640nm y 355nm), con capacidad para analizar 17 parámetros. Su configuración actual permite la detección de 5 parametros de fluorescencia provinientes del láser azul, 5 parámetros de fluorescencia del laser amarillo, 3 parámetros de fluorescencia del laser rojo y otros 2 provinientes del láser UV.
Usa FACS DIVA Software v6 como software de acquisición.

1 COUNTESS (Invitrogen): contador cellular en slide que usa Trypan Blue para cuantificar viabilidad. Requiere 10uls del cultivo.

1 FACS ARIA IIu (Becton Dickinson): separador celular digital de alta velocidad, permite la separación de 4 poblaciones al tiempo. Equipado con un láser de 407nm, 488nm y 633nm y capacidad para detectar 12 parámetros de fluorescencia, cuenta también con una unidad que permite sortear un sola célula lo que resulta muy útil para hacer clonaje de una sola célula. Se puede sortear en distintos recipientes incluyendo tubos de 5ml y 15ml asi como placas de 6-, 24- 48-, 96- y 384, slides y otro tipo de recipientes. Usa FACS Diva v6 como software de acquisición.

1 InFlux (Cytopeia-Becton Dickinson): separador celular de alta velocidad, permite la separación de 4 poblaciones al tiempo. Equipado con un láser de 355nm, 488nm, 561nm y 640nm, y capacidad para detectar 16 parámetros de fluorescencia, cuenta también con una unidad que permite sortear un sola célula lo que resulta muy útil para hacer clonaje de una sola célula. Se puede sortear en distintos recipientes incluyendo tubos de 5ml y 15ml asi como placas de 6-, 24- 48-, 96- y 384, slides y otro tipo de recipientes. Usa Spigotv6.3 como software de acquisición. Este equipo está instalado en una cabina de seguridad biológica.

Actualmente la unidad tiene capacidad para aceptar muestras biológicas de Categoria II para sortear.

Las siguientes técnicas de citometria de flujo se usan en la unidad:

• Análisis Multicolor (immunophenotipaje y marcajes intracelulares)
• Ensayos de Apoptosis (Annexin V, TUNEL, TMRE, actividad enzimatica, deteccion de DNA celular por SubG1)
• Análisis de Ciclo Celular (incorporacion de BrdU y EdU, analisis de contenido en DNA)
• Análisis Funcional (flujo de calcio, CFSE, produccion de ROS)
• Detección de fosfoproteinas (Phospho Histone-3, p38, Jnk, Stat5) en lineas celulares y primarias provinientes de tejidos
• Cell sorting

Publicaciones

• Pérez-Olivares M, Trento A, Rodriguez-Acebes S, González-Acosta D, Fernández-Antorán D, Román-García S, Martinez D, López-Briones T, Torroja C, Carrasco YR, Méndez J, Moreno de Alborán I (2018). Functional interplay between c-Myc and Max in B lymphocyte differentiation. EMBO Rep 19, e45770.
• Priego N, Zhu L, Monteiro C, Mulders M, Wasilewski D, Bindeman W, Doglio L, Martínez L, Martínez-Saez E, Cajal SRY, Megías D, Hernández-Encinas E, Blanco-Aparicio C, Martínez L, Zarzuela E, Muñoz J, Fustero-Torres C, Pineiro E, Hernández-Laín A, Bertero L, Poli V, Sánchez-Martínez M, Menendez JA, Soffietti R, Bosch-Barrera J, Valiente M (2018). STAT3 labels a subpopulation of reactive astrocytes required for brain metastasis. Nat Med 24, 1024-1035.
• Costa-Machado LF, Martín-Hernández R, Sanchez-Luengo MÁ, Hess K, Vales-Villamarin C, Barradas M, Lynch C, de la Nava D, Diaz-Ruiz A, de Cabo R, Cañamero M, Martinez L, Sanchez-Carbayo M, Herranz D, Serrano M, Fernandez-Marcos PJ (2018). Sirt1 protects from K-Ras-driven lung carcinogenesis. EMBO Rep 19, e43879.
• Bakiri L, Hamacher R, Graña O, Guío-Carrión A, Campos-Olivas R, Martinez L, Dienes HP, Thomsen MK, Hasenfuss SC, Wagner EF. (2017). Liver carcinogenesis by FOS-dependent inflammation and cholesterol dysregulation.. J Exp Med 214, 1387-1409.
• Sánchez-Luengo MA, Rovira M, Serrano M, Fernández-Marcos PJ, Martínez L (2017). Analysis of the advantages of cis reporters in optimized FACS-Gal. Cytom Part A 91, 721-729.
• López-Guadamillas E, Fernández-Marcos PJ, Pantoja C, Muñoz-Martin M, Martínez D, Gómez-López G, Campos-Olivas R, Valverde AM, Serrano M (2016). p21Cip1 plays a critical role in the physiological adaptation to fasting through activation of PPARa.. Sci Rep 6, 34542.
• Cioffi M, Vallespinos-Serrano M, Trabulo SM, Fernandez-Marcos PJ, Firment AN, Vazquez BN, Vieira CR, Mulero F, Camara JA, Cronin UP, Perez M, Soriano J, G Galvez B, Castells-Garcia A, Haage V, Raj D, Megias D, Hahn S, Serrano L, Moon A, Aicher A, Heeschen C (2015). MiR-93 Controls Adiposity via Inhibition of Sirt7 and Tbx3.. Cell Reports 12, 1594-1605.
• Alvarez S, Díaz M, Flach J, Rodriguez-Acebes S, López-Contreras AJ, Martínez D, Cañamero M, Fernández-Capetillo O, Isern J, Passegué E, Méndez J (2015). Replication stress caused by low MCM expression limits fetal erythropoiesis and hematopoietic stem cell functionality.. Nat Communications 6, 8548.
• Riddell A, Gardner R, Perez-Gonzalez A, Lopes T, Martinez L (2015). Rmax: A systematic approach to evaluate instrument sort performance using center stream catch.. Methods 82, 64-73.
• Morgado-Palacin L, Vareti G, Llanos S, Gomez-Lopez G, Martinez D, Serrano M (2015). Partial Loss of Rpl11 in Adult Mice Recapitulates Diamond-Blackfan Anemia and Promotes Lymphomagenesis.. Cell Reports 13, 712-722.
• Rodríguez-Díez E, Quereda V, Bellutti F, Prchal-Murphy M, Partida D, Eguren M, Gómez de Cedrón M, Dubus P, Cañamero M, Martínez D, Sexl V, Malumbres M (2014). Cdk4 and Cdk6 cooperate in counteracting the INK4 family of inhibitors during murine leukemogenesis.. Blood 124, 2380-2390.
• Monserrat J, Sánchez MÁ, de Paz R, Díaz D, Mur S, Reyes E, Prieto A, de la Hera A, Martínez-A C, Alvarez-Mon M. (2014). Distinctive patterns of naïve/memory subset distribution and cytokine expression in CD4 T lymphocytes in ZAP-70 B-chronic lymphocytic patients.. Cytom Part B-Clin Cy 86, 32-43.
• Abad M, Mosteiro Ll, Pantoja C, Cañamero M, Rayon T, Ors I, Graña O, Megías D, Domínguez O, Martinez D, Manzanares M, Ortega S, Serrano M (2013). Reprogramming in vivo produces teratomas and iPS cells with totipotency features.. Nature 502, 340-345.
• Thomsen MK, Bakiri L, Hasenfuss SC, Hamacher R, Martinez L, Wagner EF (2013). JUNB/AP-1 controls IFN-? during inflammatory liver disease.. J Clin Invest 123, 5258-5268.
• Fernández D1, Ortiz M, Rodríguez L, García A, Martinez D, Moreno de Alborán I (2013). The proto-oncogene c-myc regulates antibody secretion and Ig class switch recombination.. J Immunol 190, 6135-6144.
• Montserrat J, Sánchez MA, de Paz R, Díaz D, Mur S, Reyes E, Prieto A, de la Hera A, Martínez-A C, Alvarez-Mon M (2013). Distinctive patterns of naïve/memory subset distribution and cytokine expression in CD4 T lymphocytes in ZAP-70 B-chronic lymphocytic patients.. Cytom Part B-Clin Cy (in press).