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Iniciadores de Secuenciación

  • El Servicio proveerá sin cargo los iniciadores universales tales como M13Rv, M13Fw, T7, SP6 y T3. Se puede consultar la secuencia y disponibilidad de otros menos frecuentes en el documento iniciadores.xls (32 KB).
  • Remitir los iniciadores específicos de gen en un volumen de 15 µl y ajustados a una concentración de 3 pmol/µl (3 µM) en agua ultrapura o en una disolución de EDTA pH8 0,1 mM, en tubos independientes y convenientemente rotulados. Acompañar 2 µl (6 pmol) adicionales por cada molde adicional que precise el mismo iniciador.

Diseño de iniciadores

  • Sitio de unión al menos 50 bases anterior a la secuencia que se pretende obtener.
  • Tm superior a 55º y calculada con la fórmula:
    Tm= 73 +0,41(% G+C) -675/L
    (donde "% G+C" es el contenido (%) del oligo en Gs y Cs, y "L" sulongitud)
  • Longitud a partir de 17-mer (en función de su Tm)
  • Evitar trechos homopoliméricos de más de cuatro bases, especialmente al extremo 3'.